SLMAP CRISPR Activation Plasmid (h): sc-406756-ACT

SLMAP (sarcolemma associated protein) kodiert ein tail-anchored Membranprotein, das überwiegend im sarkoplasmatischen/endoplasmatischen Retikulum und in verwandten Membrankompartimenten lokalisiert ist, wo es die Membranorganisation und die Kopplung an das Zytoskelett unterstützt. Es wird mit erregungs‑kontraktionsbezogenen Prozessen, intrazellulärem Transport und der Regulation der Mikrotubulusdynamik in Verbindung gebracht und verknüpft Membran‑Scaffolding mit Signaltransduktion und struktureller Homöostase. In quergestreifter Muskulatur und im kardialen Kontext wurde SLMAP mit Signalwegen assoziiert, die für den Ionenhaushalt und die Erregungsleitung relevant sind; zudem wurden veränderte Expression oder Variantenallele in Studien zur Kardiomyopathie und zur Anfälligkeit für Arrhythmien beschrieben. Diese Eigenschaften machen SLMAP zu einem nützlichen Ziel, um membranassoziierte Scaffolding‑Netzwerke und deren Einfluss auf die Zellarchitektur sowie auf elektrophysiologisch relevante Phänotypen zu untersuchen.

SLMAP Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SLMAP-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

SLMAP Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SLMAP-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SLMAP-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen SLMAP-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SLMAP-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von SLMAP-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des SLMAP-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SLMAP-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.