Slit3 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402553-ACT

Das menschliche Gen **SLIT3** kodiert **Slit3**, ein sezerniertes Leitsignal, das überwiegend über **ROBO**-Rezeptoren signalisiert und die gerichtete Zellmigration, Axonleitung und Gewebemusterbildung reguliert. Die Slit3–ROBO-Signalgebung greift in Zytoskelett-Umbauprozesse und von kleinen GTPasen abhängige Mechanismen ein, die während der Entwicklung und Gewebehomöostase Zellbeweglichkeit und Zellpositionierung bestimmen. In nicht-neuronalen Kontexten wird SLIT3 mit der Gefäß- und Skelettbiologie in Verbindung gebracht und beeinflusst über parakrine Kommunikation angiogene Antworten sowie osteogene Umbauprozesse. Eine dysregulierte SLIT3-Expression oder -Signalgebung wurde mit veränderten Invasions-/Migrationsphänotypen und einem Umbau des Tumormikromilieus assoziiert, was SLIT3 als mechanistischen Knotenpunkt für Studien zu metastasebezogenen Signalwegen und Stromа–Epithel-Interaktionen stützt.

Slit3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SLIT3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Slit3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SLIT3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SLIT3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Slit3-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SLIT3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Slit3-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Slit3-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SLIT3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.