SLC35B4 Double Nickase Plasmid (h): sc-413728-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das SLC35B4 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- SLC35B4 Double-Nickase-Plasmid (h) und SLC35B4 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf SLC35B4 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
SLC35B4 Double Nickase Plasmid (h) | sc-413728-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SLC35B4 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-413728-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SLC35B4 kodiert einen im Golgi-Apparat lokalisierten Nukleotidzucker-Transporter, der UDP-Xylose und UDP‑N‑Acetylglucosamin in das Golgi-Lumen importiert, um die Glykosylierung und die Biosynthese von Proteoglykanen zu unterstützen. Durch die Regulierung der Verfügbarkeit von Nukleotidzuckern beeinflusst SLC35B4 die Zusammensetzung und Reifung von Glykanen auf sezernierten und membranständigen Proteinen und wirkt sich damit auf Zelloberflächen-Signalgebung und Proteintransport aus. Veränderte Nukleotidzucker-Transporte und nachgeschaltete Glykosylierungsmuster wurden mit Änderungen der Stoffwechselregulation, des Zellwachstums und von Stressantworten in Verbindung gebracht, was SLC35B4 zu einem relevanten Knotenpunkt für die Untersuchung glykanabhängiger Signalwege macht. Eine dysregulierte Glykosylierung ist häufig mit komplexer Krankheitsbiologie assoziiert, einschließlich metabolischer Dysfunktion und onkogener Phänotypen, und liefert damit einen mechanistischen Rahmen für Forschungsmodelle.
SLC35B4 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des SLC35B4-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von SLC35B4 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die SLC35B4-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit SLC35B4-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.