Plasmide CRISPR/Cas9 KO SLC25A36 (h): sc-412475

Présentation

SLC25A36 code un transporteur de solutés de la membrane interne mitochondriale qui agit comme transporteur de nucléotides, en facilitant l’échange de nucléotides pyrimidiques entre le cytosol et la matrice mitochondriale. En maintenant la disponibilité intramitochondriale des dNTP, SLC25A36 contribue à la réplication et à la réparation de l’ADN mitochondrial, à la capacité de phosphorylation oxydative et, plus largement, à l’homéostasie mitochondriale. Une perturbation du transport des nucléotides peut relier une dysfonction mitochondriale à des altérations du métabolisme énergétique, de l’équilibre rédox et au stress de réplication, des processus fréquemment étudiés dans la neurodégénérescence, la signalisation inflammatoire et la biologie tumorale. En tant que membre de la famille des transporteurs mitochondriaux, SLC25A36 est couramment étudié dans le contexte de la biogenèse des organites, des réponses au stress et de l’adaptation métabolique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SLC25A36 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SLC25A36 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SLC25A36, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SLC25A36 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SLC25A36.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SLC25A36 pour l'étude de la signalisation de SLC25A36, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SLC25A36 essentiels à la fonction de SLC25A36
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SLC25A36 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SLC25A36 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le SLC25A36 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SLC25A36. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SLC25A36 plasmide HDR (h) et le SLC25A36 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SLC25A36 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SLC25A36 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.