Skint8 CRISPR Activation Plasmid (m2): sc-437039-ACT-2

Mouse Skint8 („selection and upkeep of intraepithelial T cells protein 8“) ist ein Mitglied der SKINT-Familie, einer zur Immunglobulin-Superfamilie gehörenden Gruppe, die an der Kommunikation zwischen Epithel und Immunsystem sowie an der Regulation der Phänotypen gewebeständiger Lymphozyten beteiligt ist. Die Expression von Skint8 wird mit der Immunhomöostase an Barriereoberflächen in Verbindung gebracht und könnte Kontexte der Antigenerkennung, Zytokin-Signalnetzwerke sowie Differenzierungs- oder Erhaltungsprogramme spezialisierter T‑Zell-Subsets innerhalb des Epithels beeinflussen. Eine Fehlregulation von SKINT-Familien-Signalwegen ist für Studien zu kutaner und mukosaler Entzündung, Wirtsabwehr und Mechanismen der Immundysregulation von Interesse, die für Autoimmunität und die Immunüberwachung von Tumoren relevant sind. Geneditierung oder gezielte Störung von Skint8 in Mausmodellen ermöglicht die funktionelle Untersuchung epithelzellintrinsischer immunregulatorischer Schaltkreise, der Biologie von Zell‑Zell‑Interaktionen sowie das Mapping von Signalwegen in immunologischen und hautbiologischen Forschungs-Workflows.

Skint8 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m2) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Skint8-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Skint8 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m2) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Skint8-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Skint8-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Skint8-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Skint8-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Skint8-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Skint8-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Skint8-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.