Plasmide CRISPR d'Activation (h) Six2: sc-402975-ACT

SIX2 code le facteur de transcription homéobox Six2, un régulateur du développement qui maintient l’identité des cellules progénitrices et contrôle les programmes de spécification de lignée. Dans les tissus humains, les réseaux transcriptionnels pilotés par Six2 influencent la différenciation mésenchymateuse, les interactions épithélio–mésenchymateuses et les voies associées à l’organogenèse, avec des effets en aval sur la chronologie du cycle cellulaire et le maintien de l’état de la chromatine. Une expression dérégulée de SIX2 a été associée à des programmes de gènes du développement altérés et a été rapportée dans des contextes de prolifération et de différenciation aberrantes, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques des troubles du développement et du remodelage oncogénique des programmes transcriptionnels. En tant que régulateur se liant à l’ADN, Six2 est fréquemment utilisé comme nœud pour interroger les circuits de contrôle transcriptionnel et les décisions de destin cellulaire dans des modèles de cellules souches et progénitrices.

Six2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SIX2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Six2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SIX2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SIX2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Six2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SIX2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Six2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Six2 dans les cellules tumorales présentant une expression de SIX2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.