SIP1/ZEB2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400655-ACT

ZEB2, auch bekannt als SIP1, ist ein Zinkfinger-Transkriptionsfaktor, der an E-Box-Sequenzen bindet und die epithelial–mesenchymale Transition (EMT) reguliert, indem er epitheliale Genprogramme – einschließlich CDH1 – reprimiert sowie Zellschicksal und Differenzierung koordiniert. Über seine Interaktionen mit SMAD-Proteinen integriert SIP1/ZEB2 die TGF-β/BMP-Signalübertragung mit Chromatin-Remodeling, um die Linienspezifizierung, Migration und entwicklungsbiologische Musterbildung zu steuern. Die Aktivität von ZEB2 prägt die Entwicklung der Neuralleiste und des hämatopoetischen Systems und moduliert die Differenzierung von Immunzellen, wodurch es mit Signalwegen verknüpft ist, die Gewebemorphogenese und Entzündungsreaktionen regulieren. Eine Fehlregulation der mit ZEB2 assoziierten Transkriptionsnetzwerke wurde mit Entwicklungsstörungen sowie mit Programmen zellulärer Plastizität in Verbindung gebracht, die für Tumorprogression und metastaseassoziierte Phänotypen relevant sind.

SIP1/ZEB2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ZEB2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

SIP1/ZEB2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ZEB2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ZEB2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen SIP1/ZEB2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ZEB2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von SIP1/ZEB2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des SIP1/ZEB2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ZEB2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.