SIM2s Double Nickase Plasmid (h): sc-405609-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das SIM2s Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- SIM2s Double-Nickase-Plasmid (h) und SIM2s Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf SIM2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: SIM2s: sc-517035
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
SIM2s Double Nickase Plasmid (h) | sc-405609-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SIM2s Double Nickase Plasmid (h2) | sc-405609-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SIM2 (single-minded family bHLH transcription factor 2) kodiert die menschliche SIM2s-Isoform, einen basischen Helix-Loop-Helix-Transkriptionsfaktor mit PAS-Domäne, der kontextabhängige Genexpressionsprogramme reguliert, die an zellulärer Differenzierung und Entwicklungsmusterbildung beteiligt sind. SIM2s wirkt über PAS-vermittelte Dimerisierung mit Partnerfaktoren und die Bindung an E-Box-ähnliche regulatorische Elemente und ist damit in Transkriptionsnetzwerke eingebunden, die Linienfestlegung, epithelialen Zustand und stressresponsive Signalwege prägen. Veränderte SIM2/SIM2s-Expression wurde mit dysregulierter transkriptioneller Kontrolle in der Krebsbiologie und bei Entwicklungsstörungen in Verbindung gebracht, was seine Nutzung als mechanistischen Knotenpunkt in Studien zu Genregulation und Zellschicksal unterstützt. In der biomedizinischen Forschung wird SIM2s häufig hinsichtlich seines Einflusses auf Outputs auf Signalweg-Ebene untersucht, etwa auf differenzierungsassoziierte Transkriptionssignaturen, das epitheliale–mesenchymale Gleichgewicht und proliferationsgekoppelte Regulationsschaltkreise.
SIM2s Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des SIM2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von SIM2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die SIM2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit SIM2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.