Siglec-12 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-413805

Descripción general

SIGLEC12 codifica Siglec-12, una lectina atípica tipo inmunoglobulina que se une al ácido siálico, expresada en determinados contextos epiteliales e inmunitarios y localizada en la superficie celular. Como miembro de la familia Siglec, Siglec-12 participa en eventos de reconocimiento dependientes de glicanos que pueden influir en las interacciones célula–célula, la endocitosis y la modulación de las respuestas de señalización aguas abajo de vías asociadas a inmunorreceptores. La proteína humana se considera funcionalmente distinta de las Siglec inhibitorias canónicas debido a alteraciones en motivos conservados, lo que la convierte en un modelo útil para estudiar la divergencia en la señalización de receptores glicoinmunes. La desregulación de la expresión de Siglec-12 se ha investigado en el contexto de la biología tumoral y de los microambientes inflamatorios, lo que respalda investigaciones sobre fenotipos dependientes de la glicosilación y el diálogo cruzado inmuno-epitelial.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Siglec-12 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen SIGLEC12 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del SIGLEC12 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de SIGLEC12 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Siglec-12.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en SIGLEC12 para la investigación de la señalización de Siglec-12, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de SIGLEC12 críticos para la función de Siglec-12
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de SIGLEC12 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Siglec-12 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Siglec-12 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus SIGLEC12. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Siglec-12 (h) y el plásmido HDR Siglec-12 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología SIGLEC12 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana SIGLEC12 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.