Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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SH2-B Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422909
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- SH2-B El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico SH2-B, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: SH2-B α/β/γ/δ Anticuerpo (C-11): sc-514142
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
SH2-B Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-422909 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
El gen Sh2b1 del ratón codifica la proteína adaptadora SH2-B, un andamiaje de señalización citoplasmático que conecta las tirosina quinasas receptoras activadas y los receptores de citocinas con vías aguas abajo como JAK/STAT, PI3K–AKT y MAPK. A través de su dominio SH2 y de motivos de interacción proteína–proteína, SH2-B modula la amplitud y la duración de la señal para influir en la proliferación celular, la diferenciación y la regulación metabólica. La señalización dependiente de Sh2b1 se estudia ampliamente en el contexto de la homeostasis energética y de redes sensibles a insulina/leptina, y la alteración de la función de SH2B1 se ha vinculado a fenotipos que implican desregulación metabólica y control neuroendocrino. En sistemas inmunitarios y neuronales, SH2-B también contribuye a eventos de señalización mediada por receptores que moldean las respuestas inflamatorias y procesos asociados a sinapsis/neuritas.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO SH2-B (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Sh2b1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Sh2b1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Sh2b1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína SH2-B.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Sh2b1 para la investigación de la señalización de SH2-B, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Sh2b1 críticos para la función de SH2-B
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Sh2b1 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido SH2-B CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido SH2-B CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Sh2b1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR SH2-B (m) y el plásmido HDR SH2-B (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Sh2b1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Sh2b1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.