SH-PTP2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400260-ACT

PTPN11 codifica a SH-PTP2 (SHP2), uma fosfatase de tirosina citosólica que contém domínios SH2 em tandem e que acopla receptores tirosina-quinase ativados e receptores de citocinas à sinalização a jusante. A SHP2 é um regulador positivo central da via RAS–MAPK/ERK e contribui para a modulação da via PI3K–AKT, moldando programas de proliferação, sobrevivência, migração e diferenciação celular. Por meio da desfosforilação de proteínas de ancoragem (docking) e de nós de retroalimentação, a SHP2 influencia a amplitude e a duração dos sinais em redes de sinalização de fatores de crescimento e do sistema imune. A atividade e a expressão desreguladas de PTPN11 estão associadas a síndromes do desenvolvimento e a múltiplos contextos de câncer, tornando-o um alvo frequente para estudos mecanísticos de sinalização oncogênica e de circuitos de resistência.

SH-PTP2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PTPN11 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SH-PTP2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PTPN11 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PTPN11, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SH-PTP2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PTPN11 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SH-PTP2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SH-PTP2 em células tumorais com expressão de PTPN11 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.