Sgo2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404058-ACT

Das humane Gen **SGO2** kodiert **Shugoshin 2 (Sgo2)**, einen zentromerassoziierten Schutzfaktor des **Cohesin**-Komplexes, der dazu beiträgt, die Kohäsion der Schwesterchromatiden sowie eine korrekte Chromosomensegregation während Mitose und Meiose aufrechtzuerhalten. Sgo2 wirkt im Rahmen der Kinetochor–Zentromer-Regulation und koordiniert sich mit phosphataseabhängiger Signalgebung, um einer vorzeitigen Freisetzung von Cohesin entgegenzuwirken und eine korrekte Spindelanheftung sowie die Zuverlässigkeit von Checkpoints zu unterstützen. Eine Störung der durch **SGO2** regulierten Kohäsionsdynamik kann chromosomale Instabilität und Aneuploidie fördern – Prozesse, die häufig mit Tumorbiologie und Entwicklungsstörungen in Verbindung gebracht werden. Entsprechend wird **SGO2** in Signalwegen untersucht, die Zellzykluskontrolle, DNA-Schadensantworten und die Erhaltung der Genomstabilität verknüpfen.

Sgo2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SGO2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Sgo2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SGO2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SGO2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Sgo2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SGO2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Sgo2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Sgo2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SGO2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.