Particules Lentivirales d'Activation (h) Set1A: sc-406841-LAC

Le gène humain **SETD1A** code Set1A, un composant catalytique du complexe **COMPASS** qui dépose la méthylation de la lysine 4 de l’histone H3, avec un rôle majeur dans la marque **H3K4me3** au niveau des promoteurs actifs. En coordination avec la machinerie transcriptionnelle de l’ARN polymérase II et des cofacteurs associés à la chromatine, Set1A contribue à réguler l’accessibilité de la chromatine à proximité des promoteurs, l’initiation de la transcription et les programmes d’expression génique contrôlant la prolifération et la spécification des lignages. La régulation de la chromatine dépendante de SETD1A croise la réponse aux dommages de l’ADN, le maintien de la chromatine lié à la réplication et des réseaux transcriptionnels neurodéveloppementaux. La dérégulation de SETD1A et des voies apparentées de méthyltransférases de H3K4 a été associée à une altération de l’homéostasie transcriptionnelle et fait l’objet d’études fréquentes dans des modèles de maladies neuropsychiatriques et de remodelage épigénétique associé au cancer.

Les particules d'activation lentivirales Set1A (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de SETD1A dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Set1A (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription SETD1A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Set1A. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif SETD1A ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.