Particules Lentivirales d'Activation (h) serum reponse factor /SRF: sc-400470-LAC

Le SRF humain (serum response factor) est un facteur de transcription à domaine MADS-box qui se lie aux motifs de type boîte CArG afin de contrôler l’expression des gènes de réponse immédiate et les programmes géniques du cytosquelette. Il intègre des signaux issus de la voie MAPK/ERK via les facteurs du complexe ternaire, ainsi que de la dynamique RhoA–actine via les coactivateurs transcriptionnels apparentés à la myocardine, coordonnant la prolifération, la différenciation, la motilité et les réponses au stress. La transcription régulée par le SRF est au cœur des réseaux de gènes du muscle lisse et du muscle cardiaque, ainsi que des voies de remodelage de l’actine qui façonnent l’adhérence et la migration cellulaires. Une activité du SRF et une signalisation amont dérégulées ont été associées à une croissance aberrante et à des phénotypes invasifs en oncologie, ainsi qu’à un remodelage pathologique dans des contextes cardiovasculaires et de maladies fibrotiques.

Les particules d'activation lentivirales serum reponse factor /SRF (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de SRF dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales serum reponse factor /SRF (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription SRF, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de serum reponse factor /SRF. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif SRF ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.