Plasmide CRISPR d'Activation (h) Serine racemase: sc-402360-ACT

Le gène humain **SRR** code la sérine racémase, une enzyme dépendante du phosphate de pyridoxal qui catalyse l’interconversion de la L-sérine et de la D-sérine, un co‑agoniste clé des récepteurs du glutamate de type NMDA. En régulant la disponibilité de la D-sérine, la sérine racémase influence la neurotransmission excitatrice, la plasticité synaptique et les cascades de signalisation en aval dépendantes du calcium, dans des contextes neuronaux et gliaux. L’activité de SRR relie le métabolisme des acides aminés à la biologie redox via des interactions avec des voies qui contrôlent le stress oxydatif et l’équilibre énergétique cellulaire. Des altérations de l’expression de SRR ou de l’homéostasie de la D-sérine ont été associées à des mécanismes de maladies neuropsychiatriques et neurodégénératives, faisant de SRR une cible utile pour l’étude de la signalisation liée aux récepteurs NMDA et de la régulation métabolique.

Serine racemase Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SRR sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Serine racemase Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SRR dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SRR, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Serine racemase. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SRR natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Serine racemase au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Serine racemase dans les cellules tumorales présentant une expression de SRR silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.