Plásmido Doble Nickase (h) SERCA3: sc-402840-NIC

ATP2A3 codifica la Ca2+-ATPasa del retículo sarco/endoplásmico humano SERCA3, una ATPasa de tipo P que bombea Ca2+ citosólico hacia la luz del RE para restablecer los niveles basales de calcio tras eventos de señalización. Al controlar las reservas de Ca2+ del RE y los transitorios de Ca2+ citosólico, SERCA3 contribuye a modelar vías dependientes de calcio, incluida la entrada de calcio operada por depósitos, el plegamiento de proteínas y el control de calidad dentro del RE, y el acoplamiento estímulo-secreción en tipos celulares especializados. La expresión o actividad alteradas de ATP2A3/SERCA3 se han relacionado con una homeostasis del calcio desregulada, respuestas de estrés del RE y cambios en programas de diferenciación, con relevancia para estudios de señalización de células inmunitarias y biología epitelial. Estas funciones hacen de ATP2A3 una diana útil para desentrañar mecanismos de manejo del calcio que influyen en la proliferación, la apoptosis y la señalización inflamatoria, sin implicar resultados clínicos.

SERCA3 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ATP2A3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ATP2A3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ATP2A3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ATP2A3 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.