SERCA2 Double Nickase Plasmid (h): sc-400417-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das SERCA2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- SERCA2 Double-Nickase-Plasmid (h) und SERCA2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ATP2A2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: SERCA2: sc-376235
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
SERCA2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400417-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SERCA2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400417-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ATP2A2 kodiert die humane sarko-/endoplasmatische Retikulum-Ca2+-ATPase SERCA2, eine P-Typ-ATPase, die zytosolisches Ca2+ in das ER-Lumen transportiert, um die Ca2+-Speicherung und die Signalhomöostase aufrechtzuerhalten. Durch die Steuerung der ER-Ca2+-Beladung reguliert SERCA2 die Erregungs‑Kontraktions‑Kopplung, die Dynamik des store-operated Ca2+-Einstroms sowie die Ca2+-abhängige Kontrolle von Proteinfaltung, Sekretion und zellulären Überlebenswegen, die mit ER‑Stressantworten verknüpft sind. Eine Störung von ATP2A2 beeinträchtigt intrazelluläre Ca2+-Oszillationen und kann nachgeschaltete Signalnetzwerke, einschließlich Calcineurin/NFAT- und UPR-Signaling (Unfolded Protein Response), verändern. Varianten in ATP2A2 sind mit der Darier-Krankheit assoziiert und wurden in Zusammenhängen beschrieben, in denen die ER-Ca2+-Handhabung die kardiale und epitheliale Physiologie beeinflusst, was mechanistische Studien zu Ca2+-Signalgebung und Proteostase unterstützt.
SERCA2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ATP2A2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ATP2A2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ATP2A2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ATP2A2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.