Plásmido Doble Nickase (h) SERCA1: sc-401416-NIC

ATP2A1 codifica la Ca²⁺-ATPasa del retículo sarcoplásmico/endoplásmico SERCA1, una ATPasa de tipo P que bombea Ca²⁺ citosólico hacia el retículo sarcoplásmico para restablecer los bajos niveles basales de Ca²⁺ tras la excitación. Al impulsar el secuestro de Ca²⁺, SERCA1 modula el acoplamiento excitación–contracción, la señalización dependiente de Ca²⁺ y la homeostasis de Ca²⁺ del RE/RS, lo que influye en la proteostasis y en las respuestas al estrés. La función de SERCA1 se integra con vías que controlan el ciclado del calcio y la bioenergética muscular, incluido su acoplamiento a la liberación de Ca²⁺ mediada por el receptor de rianodina y al amortiguamiento por calsecuestrina. Las alteraciones en la actividad o la expresión de ATP2A1 se han relacionado con fenotipos de disfunción del músculo esquelético, lo que lo convierte en una diana útil para estudios mecanísticos del manejo del calcio y la fisiología de las fibras musculares.

SERCA1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ATP2A1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ATP2A1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ATP2A1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ATP2A1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.