Plasmide CRISPR/Cas9 KO Septin 8 (m): sc-422891

Présentation

Sept8 code la septine 8, une protéine cytosquelettique liant le GTP qui s’assemble en filaments de septines hétéro-oligomériques et en structures en anneau servant d’échafaudage aux membranes et organisant l’interface actine–microtubules. La septine 8 contribue à la cytokinèse, à la polarité cellulaire et au trafic vésiculaire, et elle aide à compartimenter la signalisation en formant des barrières de diffusion au niveau de domaines membranaires spécialisés. Dans les neurones, les complexes de septines contenant la septine 8 sont associés à la morphogenèse des neurites et à l’organisation synaptique, ce qui étaye les études du développement et du maintien des circuits dans des modèles murins. Une dynamique dérégulée du réseau de septines a été associée à des altérations de la division cellulaire et du remodelage du cytosquelette observées dans des contextes de recherche sur le cancer et les maladies neurodégénératives, faisant de Sept8 une cible utile pour l’exploration mécanistique des voies biologiques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Septin 8 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Sept8 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Sept8, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Sept8 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Septin 8.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Sept8 pour l'étude de la signalisation de Septin 8, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Sept8 essentiels à la fonction de Septin 8
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Sept8 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Septin 8 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Septin 8 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Sept8. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Septin 8 plasmide HDR (m) et le Septin 8 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Sept8 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Sept8 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.