Septin 4 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402288-ACT

ヒトのSEPT4は、GTP結合性の細胞骨格スキャフォールドタンパク質であるセプチン4をコードしており、ヘテロオリゴマー性のフィラメントや環状構造体を形成して膜ドメインの配置を組織化します。セプチン4は、アクチンや微小管、ならびに細胞極性の制御因子と協調することで、細胞質分裂、ミッドボディの成熟、小胞輸送、拡散バリアの形成に寄与します。これらの役割を通じてSEPT4は、細胞分裂の忠実性と、神経系および上皮の恒常性に影響する細胞骨格リモデリングプログラムの制御に関与します。セプチンの構造形成異常やSEPT4発現の破綻は、文献上、神経変性過程、アポトーシスシグナルの変化、ならびにがんに伴う増殖・遊走の変化と関連づけられており、細胞骨格および細胞周期研究における機序解明の結節点としての有用性を支持しています。

Septin 4 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SEPT4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Septin 4 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SEPT4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSEPT4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Septin 4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSEPT4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSeptin 4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSEPT4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSeptin 4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。