SENP6 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404246-ACT

SENP6 kodiert eine SUMO-spezifische Protease, die SUMO-Modifikationen von Zielproteinen entfernt und dadurch die SUMO-Homöostase mitgestaltet sowie Protein-Stabilität, -Lokalisation und Signalübertragungsdynamik reguliert. Durch die DeSUMOylierung wichtiger Substrate unterstützt SENP6 die Genomintegrität, indem es Signalwege der DNA-Schadensantwort, die Chromatinorganisation und den Zellzyklus beeinflusst. Die Funktion von SENP6 ist zudem mit der Kontrolle zentromerischer und kinetochorassoziierter Prozesse verknüpft, die eine korrekte Chromosomensegregation sicherstellen. Eine fehlregulierte Aktivität des SUMO-Systems, einschließlich veränderter SENP6-Expression oder -Aktivität, wird häufig im Zusammenhang mit Genominstabilität und krebsrelevanten Stressantwort-Phänotypen untersucht.

SENP6 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SENP6-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

SENP6 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SENP6-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SENP6-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen SENP6-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SENP6-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von SENP6-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des SENP6-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SENP6-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.