SEMA7A Double Nickase Plasmid (h): sc-403873-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das SEMA7A Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- SEMA7A Double-Nickase-Plasmid (h) und SEMA7A Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf SEMA7A abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: SEMA7A: sc-374432
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
SEMA7A Double Nickase Plasmid (h) | sc-403873-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SEMA7A Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403873-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SEMA7A (Semaphorin 7A/CD108) ist ein über einen Glycosylphosphatidylinositol-(GPI)-Anker membrangebundenes Leit- und immunregulatorisches Protein, das Zell-Zell- und Zell-Matrix-Interaktionen vermittelt. Es signalisiert über Rezeptoren, darunter Integrine und Plexin-Signalwege, um Zytoskelett-Umbau, Adhäsion, Migration und Axonwachstum zu modulieren, und kann die inflammatorische Aktivierung sowie Programme des Gewebeumbaus beeinflussen. In menschlichen Zellen wird SEMA7A mit der Regulation des Traffickings von Immunzellen und fibrotischen Antworten in Verbindung gebracht und verknüpft damit Mechanismen, die für chronische Entzündung, Neurobiologie und das Remodeling des Mikromilieus relevant sind. Eine dysregulierte SEMA7A-Expression oder -Signalgebung wurde mit pathologischen Veränderungen bei Fibrose sowie mit tumorassoziierter Immun- und Stromadynamik assoziiert, was seinen Einsatz als Zielstruktur in mechanistischen Studien unterstützt.
SEMA7A Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des SEMA7A-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von SEMA7A abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die SEMA7A-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit SEMA7A-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.