SEMA4A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422880

Visão geral

Sema4a codifica a semaforina-4A (SEMA4A), uma molécula de orientação associada à membrana que também atua como ligante imunorregulador, influenciando a comunicação célula–célula. Em camundongos, a SEMA4A contribui para a orientação axonal e a organização de sinapses, ao mesmo tempo que modula a ativação e a diferenciação de células T e as interações com células apresentadoras de antígeno por meio de redes de sinalização de semaforinas e vias mediadas por receptores. Esses processos se cruzam com a remodelação do citoesqueleto, a migração celular e programas de sinalização inflamatória que moldam a homeostase tecidual. A atividade desregulada de Sema4a tem sido associada a patologias mediadas pelo sistema imune e a mecanismos neuroinflamatórios, sustentando seu estudo em modelos de autoimunidade, neurobiologia e inflamação de tecidos de barreira.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO SEMA4A (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Sema4a em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Sema4a, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Sema4a na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína SEMA4A.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Sema4a para a investigação da sinalização de SEMA4A, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Sema4a críticos para a função SEMA4A
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Sema4a para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo SEMA4A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo SEMA4A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Sema4a. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo SEMA4A Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR SEMA4A (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Sema4a para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Sema4a definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.