Plasmide CRISPR d'Activation (h) SEMA3F: sc-403710-ACT

SEMA3F code la sémaphorine‑3F, un signal de guidage sécrété qui agit principalement via les récepteurs neuropiline et plexine afin de réguler le remodelage du cytosquelette, la migration cellulaire directionnelle et le guidage axonal. Dans les tissus non neuronaux, SEMA3F participe à des voies contrôlant la communication cellule‑cellule, la dynamique de l’adhésion et l’organisation du réseau vasculaire, ce qui l’associe à des processus tels que l’organisation tissulaire et la signalisation du microenvironnement. Une expression altérée de SEMA3F a été liée, en biologie du cancer, à une motilité dérégulée et à un comportement invasif ; elle est également étudiée dans des contextes neurodéveloppementaux et neuro‑inflammatoires, où les signaux de guidage influencent la formation des circuits et le dialogue immuno‑neuronal. En tant que régulateur de la signalisation des sémaphorines dépendant de ses ligands, SEMA3F constitue un nœud exploitable pour explorer les programmes de guidage et de migration médiés par les récepteurs.

SEMA3F Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SEMA3F sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SEMA3F Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SEMA3F dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SEMA3F, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SEMA3F. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SEMA3F natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SEMA3F au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SEMA3F dans les cellules tumorales présentant une expression de SEMA3F silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.