Plásmido CRISPR de Activación (m) SELENBP1: sc-422870-ACT

El gen murino **Selenbp1** codifica la proteína 1 de unión al selenio (SELENBP1), una proteína citosólica conservada implicada en el manejo celular del selenio y en la homeostasis redox. La expresión de SELENBP1 se asocia con frecuencia al estado metabólico y a la diferenciación, con vínculos descritos con las respuestas al estrés oxidativo, la función mitocondrial y la regulación de especies reactivas de azufre/selenio. Las alteraciones en los niveles de SELENBP1 se han relacionado con cambios en la proliferación celular y la invasividad en biología del cáncer, y también se han estudiado en contextos de inflamación y lesión tisular en los que se ve perturbado el equilibrio redox. Como marcador del estado metabólico y oxidativo celular, SELENBP1 es útil para desentrañar vías que conectan la biología del selenio con programas transcripcionales y fenotipos de adaptación al estrés.

SELENBP1 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Selenbp1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SELENBP1 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Selenbp1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Selenbp1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SELENBP1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Selenbp1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SELENBP1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SELENBP1 en células tumorales con expresión de Selenbp1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.