SELENBP1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403679-ACT

SELENBP1 (seleniumbindendes Protein 1) ist ein zytosolisches, selenassoziiertes Protein, das an der zellulären Redox-Homöostase und der metabolischen Regulation beteiligt ist. Es wurden Funktionen in entgiftungsbezogenen Prozessen sowie in der Modulation der Proteinfaltung und von Antworten auf oxidativen Stress beschrieben. Seine Expression ist in zahlreichen Tumorentitäten und in entzündlichen Kontexten häufig verändert, wodurch es sich als nützlicher molekularer Marker für Veränderungen des Differenzierungszustands, der zellulären Stressanpassung und der metabolischen Umprogrammierung eignet. SELENBP1 wird mit Signalwegen in Verbindung gebracht, die die Handhabung reaktiver Sauerstoffspezies, den Xenobiotika-Stoffwechsel und Zellzustandswechsel betreffen, welche Proliferations- und Migrationsphänotypen beeinflussen. Entsprechend wird SELENBP1 häufig als funktioneller Marker und Regulator in mechanistischen Modellen der Krebsbiologie, des Gewebeumbaus und stressresponsiver Signalübertragung untersucht.

SELENBP1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SELENBP1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

SELENBP1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SELENBP1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SELENBP1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen SELENBP1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SELENBP1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von SELENBP1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des SELENBP1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SELENBP1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.