SEC16L Double Nickase Plasmid (h): sc-411387-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das SEC16L Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- SEC16L Double-Nickase-Plasmid (h) und SEC16L Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf SEC16A abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
SEC16L Double Nickase Plasmid (h) | sc-411387-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SEC16L Double Nickase Plasmid (h2) | sc-411387-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SEC16A kodiert SEC16L, ein peripheres Membran-Scaffold, das endoplasmatische-Reticulum-(ER)-Austrittsstellen organisiert und die Assemblierung des COPII-Coats während des Transports vom ER zum Golgi koordiniert. Durch die Regulation von Rekrutierung und Turnover von COPII-Komponenten trägt SEC16L zur Kontrolle von sekretorischem Fluss, Membrantransport und Organellen-Homöostase bei – mit nachgelagerten Effekten auf Proteostase und die zelluläre Anpassung an Stress. Störungen der frühen sekretorischen Route können das Trafficking von Signalrezeptoren und die metabolische Regulation beeinflussen; eine Dysregulation von SEC16A/SEC16L wurde daher in Zusammenhängen untersucht, in denen ER-Stress, Sekretion und Membrandynamik zu krankheitsrelevanten Phänotypen beitragen. Damit ist SEC16L ein nützliches Ziel, um zu untersuchen, wie ER-Export mit Autophagie, Signalwegen der Unfolded-Protein-Response und der trafficking-abhängigen Steuerung des Zellzustands zusammenwirkt.
SEC16L Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des SEC16A-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von SEC16A abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die SEC16A-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit SEC16A-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.