SDHC Double Nickase Plasmid (h): sc-405559-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das SDHC Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- SDHC Double-Nickase-Plasmid (h) und SDHC Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf SDHC abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: SDHC: sc-515102
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
SDHC Double Nickase Plasmid (h) | sc-405559-NIC | 20 µg | $410.00 |
SDHC kodiert die membranverankerte Untereinheit C des Succinat-Dehydrogenase-Komplexes, einen essenziellen Bestandteil des mitochondrialen Komplexes II, der den Tricarbonsäurezyklus (TCA-Zyklus) mit der Elektronentransportkette verknüpft, indem er die Oxidation von Succinat und die Elektronenübertragung auf Ubichinon unterstützt. Als Teil des Ankers in der inneren Mitochondrienmembran trägt SDHC zur Stabilisierung der Assemblierung von Komplex II bei und ermöglicht eine effiziente oxidative Phosphorylierung; dadurch beeinflusst es das zelluläre Redoxgleichgewicht und den Umgang mit reaktiven Sauerstoffspezies. Eine Störung von SDHC kann die mitochondriale Atmung beeinträchtigen und die Anreicherung von Succinat fördern, was nachgelagerte Effekte auf metabolische Signalwege und die epigenetische Regulation über eine veränderte Aktivität α‑Ketoglutarat‑abhängiger Dioxygenasen hat. Veränderungen in SDHC sind mit mitochondrialer Dysfunktion assoziiert und wurden in der Biologie hereditärer Paragangliome/Phäochromozytome impliciert, was SDHC zu einem relevanten Ziel für die Untersuchung metabolischer Reprogrammierung sowie von Stressantwort‑Signalwegen macht.
SDHC Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des SDHC-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von SDHC abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die SDHC-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit SDHC-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.