SARM CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403427

Übersicht

Sterile alpha and TIR motif–containing 1 (SARM1; SARM) ist ein in Axonen angereichertes Adapterprotein der angeborenen Immunität und eine NADase, die als zentraler Ausführer der programmierten Axondegeneration fungiert. Nach neuronaler Schädigung oder metabolischem Stress fördert die Aktivierung von SARM1 eine rasche Depletion von NAD+, energetisches Versagen und den Abbau des Zytoskeletts und ist dabei in Signalwege eingebunden, die die NMN/NAD-Homöostase, mitochondriale Dysfunktion, Calciumeinstrom und MAPK-Signalisierung regulieren. Eine dysregulierte SARM1-Aktivität wurde mit neurodegenerativen und neuroinflammatorischen Kontexten in Verbindung gebracht, einschließlich peripherer Neuropathien und axonopathieassoziierter Erkrankungen, bei denen Axonerhalt und Stressantworten beeinträchtigt sind. Als Signal-Knotenpunkt, der die Biologie der TIR-Domäne mit metabolischem Zusammenbruch verbindet, wird SARM1 breit hinsichtlich seiner Rollen für Axonintegrität, neuronales Überleben und angeboren-immunassoziierte Signalgebung untersucht.

Das SARM CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SARM1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SARM1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SARM1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die SARM-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SARM1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der SARM-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SARM1-Exone abzielen, die für die SARM-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SARM1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom SARM CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom SARM CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SARM1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das SARM HDR-Plasmid (h) und SARM HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SARM1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SARM1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.