Sar1a CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422799

Übersicht

Sar1a kodiert die kleine GTPase SAR1A, einen essenziellen Initiator der Bildung von COPII-beschichteten Vesikeln an ER-Austrittsstellen, die den Transport vom endoplasmatischen Retikulum (ER) zum Golgi-Apparat antreibt. Durch den Wechsel zwischen GDP- und GTP-gebundenen Zuständen fördert SAR1A die Membrankrümmung und rekrutiert die SEC23/SEC24- sowie SEC13/SEC31-Komplexe, wodurch der Fluss im sekretorischen Weg und die Proteostase unterstützt werden. Der Sar1a-abhängige Transport beeinflusst den Umgang mit Lipiden und Lipoproteinen, die Sekretion von Bestandteilen der extrazellulären Matrix sowie die Lieferung von Zelloberflächenrezeptoren und ist damit mit einer breiten Regulation von Signal- und Differenzierungsprogrammen verknüpft. Störungen des COPII-vermittelten Transports und der ER-Homöostase sind an Stressantworten und an Pathologien beteiligt, die für Entwicklungs- und Stoffwechselphänotypen relevant sind, wodurch Sar1a einen nützlichen Ansatzpunkt für mechanistische Studien zur sekretionsabhängigen Biologie darstellt.

Das Sar1a CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Sar1a-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Sar1a-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Sar1a nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Sar1a-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Sar1a-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Sar1a-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Sar1a-Exone abzielen, die für die Sar1a-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Sar1a-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Sar1a CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Sar1a CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Sar1a-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Sar1a HDR-Plasmid (m) und Sar1a HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Sar1a-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Sar1a-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.