SAMC CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-414066

Übersicht

Human SLC25A26 kodiert SAMC (S‑Adenosylmethionin‑mitochondrialer Carrier), einen Transporter der inneren Mitochondrienmembran, der S‑Adenosylmethionin in die Matrix importiert, um mitochondriale Methylierungsreaktionen aufrechtzuerhalten. Durch die Bereitstellung von SAM für RNA‑, Protein‑ und Metabolit‑Methyltransferasen unterstützt SAMC die mitochondriale Genexpression, die Homöostase der oxidativen Phosphorylierung sowie die redoxgekoppelte metabolische Anpassung. Eine Störung des mitochondrialen SAM‑Transports beeinträchtigt die Koordination des Ein‑Kohlenstoff‑Stoffwechsels zwischen Zytosol und Mitochondrien und kann die Verarbeitung von mtDNA/mtRNA sowie die Funktion der Atmungskette verändern. Varianten, die die Aktivität von SLC25A26 beeinflussen, wurden mit Phänotypen mitochondrialer Dysfunktion in Verbindung gebracht, was dieses Gen für mechanistische Studien zur Biologie mitochondrialer Erkrankungen und zu metabolischen Stressantworten relevant macht.

Das SAMC CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SLC25A26-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SLC25A26-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SLC25A26 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die SAMC-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SLC25A26-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der SAMC-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SLC25A26-Exone abzielen, die für die SAMC-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SLC25A26-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom SAMC CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom SAMC CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SLC25A26-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das SAMC HDR-Plasmid (h) und SAMC HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SLC25A26-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SLC25A26-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.