Plasmide CRISPR d'Activation (h) SA-1: sc-403116-ACT

STAG1 code pour SA-1, un composant central du complexe de cohésine, qui régule la cohésion des chromatides sœurs, l’architecture de la chromatine à grande échelle et la communication à longue distance entre enhancers et promoteurs. Par les rôles de la cohésine dans la ségrégation des chromosomes et la réparation des cassures double brin de l’ADN, SA-1 contribue à la stabilité du génome et à la progression du cycle cellulaire, en s’articulant avec des voies qui contrôlent les réponses au stress de réplication et les programmes transcriptionnels. L’activité de STAG1 influence l’expression génique spécifique de lignée en modelant les domaines d’association topologique (TAD) et en facilitant la formation régulée de boucles de chromatine. La dérégulation de sous-unités de la cohésine, dont STAG1, est associée à des altérations du contrôle transcriptionnel et à une instabilité chromosomique observées dans divers contextes de recherche liés aux maladies, notamment le cancer et des mécanismes associés aux cohésinopathies.

SA-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de STAG1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SA-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus STAG1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription STAG1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SA-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus STAG1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SA-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SA-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de STAG1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.