Plásmido CRISPR de Activación (h) S-100 α chain: sc-402065-ACT

S100A1 codifica la cadena α de S-100, una proteína EF-hand de unión a calcio que actúa como mediador de señalización, conectando la dinámica intracelular de Ca2+ con redes de interacción proteína–proteína. En células humanas, S100A1 participa en la regulación de la organización del citoesqueleto, la motilidad celular y la señalización de respuesta al estrés, influyendo en procesos como la miogénesis, la función mitocondrial y el acoplamiento excitación–contracción mediante vías dependientes de calcio. Se ha descrito una expresión alterada de S100A1 en múltiples contextos patológicos, entre ellos disfunción cardiovascular, remodelación neuromuscular y cánceres, donde puede afectar programas de proliferación, invasión y diferenciación. Como lectura molecular de estados de señalización dependientes de calcio, S100A1 se estudia comúnmente en el mapeo de vías y en modelos mecanísticos de la homeostasis específica de tejidos y de la remodelación asociada a enfermedad.

S-100 α chain El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de S100A1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

S-100 α chain El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus S100A1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional S100A1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de S-100 α chain. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo S100A1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de S-100 α chain en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía S-100 α chain en células tumorales con expresión de S100A1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.