RYK Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402654

Descripción general

RYK (receptor de tipo tirosina quinasa) codifica un receptor transmembrana atípico de paso único que funciona principalmente como correceptor en la señalización WNT no canónica, incluidas las vías impulsadas por WNT5A que regulan la polaridad celular, la migración direccional y la dinámica del citoesqueleto. Mediante interacciones con ligandos WNT y receptores Frizzled, RYK puede influir en la polaridad planar celular y en efectores aguas abajo como JNK, conectando señales extracelulares con programas transcripcionales y morfogenéticos. La actividad de RYK se ha asociado con el desarrollo neural y la guía axonal, y se ha descrito una desregulación de la señalización RYK/WNT en contextos de invasión tumoral, fenotipos asociados a metástasis y microambientes inflamatorios. Estas propiedades hacen de RYK un objetivo útil para explorar el crosstalk entre la señalización WNT, la adhesión celular y el comportamiento migratorio en modelos de células humanas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO RYK (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen RYK en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del RYK junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de RYK tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína RYK.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en RYK para la investigación de la señalización de RYK, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de RYK críticos para la función de RYK
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de RYK para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido RYK CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido RYK CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus RYK. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR RYK (h) y el plásmido HDR RYK (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología RYK para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana RYK definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.