ROGDI Double Nickase Plasmid (m): sc-425785-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ROGDI Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ROGDI Double-Nickase-Plasmid (m) und ROGDI Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Rogdi abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ROGDI Double Nickase Plasmid (m) | sc-425785-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ROGDI Double Nickase Plasmid (m2) | sc-425785-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Rogdi kodiert ROGDI, ein konserviertes Protein, das vermutlich zur Aufrechterhaltung der zellulären Homöostase beiträgt – unter anderem über Funktionen im Zusammenhang mit der nukleären Organisation und stressresponsiven Prozessen. Obwohl seine molekularen Interaktionspartner noch nicht vollständig definiert sind, wurde ROGDI mit Signalwegen in Verbindung gebracht, die die Zellviabilität und die neuronale Entwicklung beeinflussen; dies passt zu den Phänotypen, die für ROGDI‑assoziierte neuroentwicklungsbedingte Erkrankungen beschrieben wurden. In Mausmodellen bietet eine Störung von Rogdi einen gut handhabbaren Ansatz, um Gen‑Funktions‑Beziehungen im Kontext von Gewebereifung und Stresssignalgebung zu untersuchen. Diese Studien unterstützen mechanistische Untersuchungen, die eine ROGDI‑Dysfunktion mit Entwicklungsstörungen in Verbindung bringen, ohne klinische Ergebnisse zu implizieren.
ROGDI Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Rogdi-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Rogdi abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Rogdi-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Rogdi-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.