Particules Lentivirales d'Activation (m) Rock-2: sc-422695-LAC

Mouse Rock2 code la kinase 2 associée à Rho, contenant un domaine coiled-coil (ROCK2), une sérine/thréonine kinase agissant en aval de RhoA pour contrôler la contractilité actomyosine, la dynamique des adhérences focales et le remodelage du cytosquelette. ROCK2 régule la phosphorylation de substrats tels que MYL2/MLC et LIMK, influençant la forme cellulaire, la motilité, la cytocinèse et la mécanotransduction via les voies RhoA–ROCK–myosine et LIMK–cofiline. Dans des contextes immunitaires, vasculaires et neuronaux, des altérations de la signalisation ROCK2 ont été associées à une dérégulation des réponses inflammatoires, à la fonction de barrière endothéliale, au remodelage lié à la fibrose et à la connectivité neuronale. Ces propriétés font de Rock2 un nœud clé pour l’étude de programmes de signalisation dépendants du cytosquelette dans le développement et des phénotypes cellulaires pertinents pour les maladies.

Les particules d'activation lentivirales Rock-2 (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Rock2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Rock-2 (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Rock2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Rock-2. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Rock2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.