Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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RKIP Double Nickase Plasmid (h): sc-401270-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das RKIP Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- RKIP Double-Nickase-Plasmid (h) und RKIP Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf PEBP1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: RKIP: sc-365973
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
RKIP Double Nickase Plasmid (h) | sc-401270-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
RKIP Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401270-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane **PEBP1**-Gen kodiert das **Raf-Kinase-Inhibitorprotein** (RKIP), einen konservierten Modulator der Signaltransduktion, der die **RAF1–MEK–ERK**-Signalgebung begrenzt und darüber hinaus weitere Kinasenetzwerke beeinflussen kann, die an Proliferation, Differenzierung und Stressantworten beteiligt sind. RKIP greift zudem in GPCR-Kinase-Signalwege ein und trägt zur Regulation von **NF-κB**-gekoppelter inflammatorischer Signalgebung sowie von apoptosisbezogenen Prozessen bei. Über diese Funktionen hilft RKIP, zelluläre Entscheidungen zwischen Wachstum und Zelltod zu steuern, mit nachgelagerten Effekten auf Migration und Programme der epithelial–mesenchymalen Transition. Eine veränderte Expression oder Aktivität von PEBP1/RKIP wurde mit unterschiedlichen pathologischen Kontexten in Verbindung gebracht, darunter Krebsbiologie sowie neuroinflammatorische oder neurodegenerative Mechanismen, was es zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Analyse von Signalwegen macht.
RKIP Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des PEBP1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von PEBP1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die PEBP1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit PEBP1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.