Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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RIP/Rab CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-420946
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- RIP/Rab Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im RIP/Rab-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: RIP/Rab: sc-166651
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
RIP/Rab CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) | sc-420946 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
Agfg1 kodiert RIP/Rab, ein ArfGAP, das die Signalgebung von ADP-Ribosylierungsfaktoren mit endozytotischem Membrantransport und der Organisation des Zytoskeletts koppelt. Durch die Regulation von Zyklen kleiner GTPasen trägt RIP/Rab zur Rezeptorinternalisierung, zur Abschnürung von Vesikeln und zum Recycling von Endosomen zurück zur Plasmamembran bei – Prozesse, die die Output-Signalgebung von Wachstumsfaktoren beeinflussen. Störungen dieser Trafficking-Knotenpunkte können Zellpolarität, Migration und Stressantworten verändern und verknüpfen Agfg1-abhängige Signalwege in Modellsystemen mit Phänotypen, die für Neurobiologie und das Verhalten von Krebszellen relevant sind. In Mausstudien ist Agfg1 daher nützlich, um zu untersuchen, wie Membrantransport mit Signaltransduktion und zellulärer Homöostase zusammenwirkt.
Das RIP/Rab CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Agfg1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Agfg1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Agfg1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die RIP/Rab-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Agfg1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der RIP/Rab-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf Agfg1-Exone abzielen, die für die RIP/Rab-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere Agfg1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom RIP/Rab CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom RIP/Rab CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Agfg1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das RIP/Rab HDR-Plasmid (m) und RIP/Rab HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Agfg1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Agfg1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.