RIM-BP2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406740

Übersicht

RIMBP2 kodiert RIM-BP2, ein präsynaptisches Gerüstprotein der aktiven Zone, das spannungsabhängige Ca2+-Kanäle über Interaktionen mit RIM-Proteinen und weiteren synaptischen Komponenten an die Maschinerie der Neurotransmitterfreisetzung koppelt. Durch die Organisation des Ca2+-Einstroms in Abstimmung mit Andocken und Priming synaptischer Vesikel unterstützt RIM-BP2 eine effiziente, durch Aktionspotenziale ausgelöste Exozytose sowie kurzzeitige synaptische Plastizität an exzitatorischen Synapsen. Dieses Protein ist an Ca2+-abhängiger Signalübertragung im präsynaptischen Endknöpfchen beteiligt und beeinflusst die Dynamik des Vesikelzyklus, die die synaptische Stärke mitbestimmt. Genetische Störungen von RIMBP2 wurden mit neuroentwicklungsbezogenen und neuropsychiatrischen Phänotypen in Verbindung gebracht, was es für die Untersuchung von Defekten der synaptischen Transmission und Dysfunktionen auf Schaltkreisebene relevant macht.

Das RIM-BP2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des RIMBP2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des RIMBP2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von RIMBP2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die RIM-BP2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von RIMBP2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der RIM-BP2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf RIMBP2-Exone abzielen, die für die RIM-BP2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere RIMBP2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom RIM-BP2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom RIM-BP2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des RIMBP2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das RIM-BP2 HDR-Plasmid (h) und RIM-BP2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von RIMBP2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten RIMBP2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.