Plásmido Doble Nickase (h) Rictor: sc-400710-NIC

RICTOR codifica rictor, un componente de andamiaje esencial del complejo mTOR 2 (mTORC2) que coordina la señalización de factores de crecimiento con el metabolismo celular, la supervivencia y la organización del citoesqueleto. Mediante la fosforilación dependiente de mTORC2 de quinasas AGC como AKT (Ser473), SGK1 e isoformas de PKC, rictor regula la salida de la señalización de insulina/PI3K, programas de transporte iónico y la dinámica de actina que influyen en la migración y la polaridad celular. La actividad desregulada de RICTOR/mTORC2 se estudia con frecuencia en contextos de señalización oncogénica, disfunción metabólica y remodelación adaptativa al estrés, donde un ajuste alterado de la vía de AKT puede reconfigurar fenotipos de proliferación y resistencia. Como resultado, RICTOR se utiliza ampliamente como un punto de entrada genético para diseccionar la topología de la red de mTOR y el crosstalk entre vías en modelos de células humanas.

Rictor El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus RICTOR en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de RICTOR. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de RICTOR. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con RICTOR alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.