Plasmide CRISPR/Cas9 KO Ribosomal Protein LP0 (m): sc-419183

Présentation

Rplp0 code la protéine ribosomique LP0 (P0), un composant central de la grande sous-unité ribosomique 60S qui, avec les protéines P1/P2, forme la tige ribosomique et favorise le recrutement des facteurs de traduction ainsi que l’activation des GTPases pendant l’élongation. Protéine ribosomique constitutive et hautement conservée, LP0 est indispensable à la biogenèse des ribosomes, à la synthèse globale des protéines et aux programmes de croissance cellulaire et d’adaptation au stress liés à la fonction nucléolaire. La perturbation des protéines ribosomiques peut dérégler le contrôle traductionnel et la protéostasie, contribuant à des phénotypes de type ribosomopathie et à des altérations de la prolifération, de l’apoptose et de la différenciation dans des contextes pertinents pour la maladie. Dans les modèles murins, Rplp0 est aussi largement utilisé comme gène de référence, de sorte que sa perturbation ciblée est informative pour évaluer les stratégies de normalisation et les phénotypes dépendants de la traduction.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Ribosomal Protein LP0 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Rplp0 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Rplp0, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Rplp0 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Ribosomal Protein LP0.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Rplp0 pour l'étude de la signalisation de Ribosomal Protein LP0, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Rplp0 essentiels à la fonction de Ribosomal Protein LP0
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Rplp0 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Ribosomal Protein LP0 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Ribosomal Protein LP0 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Rplp0. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Ribosomal Protein LP0 plasmide HDR (m) et le Ribosomal Protein LP0 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Rplp0 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Rplp0 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.