Ribosomal Protein L30 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406356

Panoramica

RPL30 codifica per la proteina ribosomiale L30, un componente centrale della subunità ribosomiale maggiore 60S che contribuisce all’assemblaggio del ribosoma e all’allungamento della traduzione. Nell’ambito della rete di biogenesi dei ribosomi e sintesi proteica, RPL30 sostiene la proteostasi e la segnalazione associata alla crescita, consentendo una traduzione efficiente dell’mRNA. La perturbazione delle proteine ribosomiali può attivare risposte di stress nucleolare e alterare i checkpoint dipendenti da p53, collegando la funzione del ribosoma al controllo del ciclo cellulare e all’apoptosi. La biogenesi ribosomiale e il controllo della traduzione deregolati sono caratteristiche ricorrenti in stati proliferativi e di adattamento allo stress, rendendo RPL30 rilevante per studiare i meccanismi che accoppiano la capacità di traduzione alla fitness cellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Ribosomal Protein L30 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene RPL30 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del RPL30 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto RPL30 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Ribosomal Protein L30.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di RPL30 per lo studio della segnalazione di Ribosomal Protein L30, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni RPL30 critici per la funzione di Ribosomal Protein L30
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di RPL30 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Ribosomal Protein L30 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Ribosomal Protein L30 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus RPL30. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Ribosomal Protein L30 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Ribosomal Protein L30 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia RPL30 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio RPL30 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.