Riboflavin kinase Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-418359
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- Riboflavin kinase O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico Riboflavin kinase, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:Riboflavin kinase Anticorpo (E-7): sc-398830
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Riboflavin kinase Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-418359 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
O RFK humano codifica a riboflavina quinase, uma enzima citosólica que fosforila a riboflavina (vitamina B2) em mononucleótido de flavina (FMN), fornecendo um precursor essencial para a biossíntese de dinucleótido de flavina e adenina (FAD). Ao controlar a disponibilidade intracelular de FMN/FAD, o RFK sustenta reações de oxirredução dependentes de flavoproteínas que afetam o metabolismo oxidativo mitocondrial, a defesa antioxidante e a bioenergética celular de forma mais ampla. Alterações na utilização da riboflavina e na homeostase de cofatores flavínicos têm sido associadas a disfunção metabólica e fenótipos ligados ao stress oxidativo, tornando o RFK um nó útil para estudar a enzimologia dependente de vitaminas. Assim, a função do RFK é relevante para investigações de processos mitocondriais, sinalização redox e regulação nutriente–cofator em modelos celulares humanos.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Riboflavin kinase (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene RFK em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do RFK, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do RFK na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Riboflavin kinase.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de RFK para a investigação da sinalização de Riboflavin kinase, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) RFK críticos para a função Riboflavin kinase
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos RFK para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo Riboflavin kinase Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo Riboflavin kinase Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus RFK. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo Riboflavin kinase Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR Riboflavin kinase (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia RFK para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo RFK definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.