Plásmido Doble Nickase (h) RhoA: sc-400052-NIC

RHOA codifica la pequeña GTPasa RhoA, un regulador central de la dinámica del citoesqueleto de actina, la forma celular y la contractilidad, mediante el ciclo entre los estados unidos a GDP y a GTP. La RhoA activa señaliza de forma destacada a través de los efectores ROCK y mDia para controlar la formación de fibras de estrés, el recambio de las adhesiones focales, la citocinesis y la mecanotransducción, con una integración más amplia en vías dependientes de GPCR e integrinas. La actividad de RhoA influye en la migración celular, la función de barrera epitelial y respuestas transcripcionales vinculadas a la tensión del citoesqueleto. Se han descrito desregulaciones de la señalización de RHOA y mutaciones recurrentes en múltiples tipos de cáncer, y también se la ha implicado en el remodelado cardiovascular y en procesos del neurodesarrollo, lo que respalda su relevancia en redes de señalización asociadas a enfermedad.

RhoA El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus RHOA en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de RHOA. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de RHOA. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con RHOA alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.