Plasmide CRISPR/Cas9 KO RGS4 (h): sc-418013

Présentation

RGS4 code le régulateur de la signalisation des protéines G 4 (Regulator of G protein Signaling 4), une protéine activatrice de l’activité GTPase qui accélère l’arrêt des signaux dépendant des GPCR en favorisant l’hydrolyse du GTP par la sous-unité Gα. En limitant les voies de seconds messagers en aval, telles que la signalisation cAMP/PKA et PLCβ/Ca2+, RGS4 module la désensibilisation des récepteurs, l’excitabilité neuronale et les réponses transcriptionnelles dépendantes du stimulus. Elle est exprimée dans de nombreux tissus, avec des rôles marqués dans le système nerveux, et a été associée à la modulation de la signalisation synaptique et à des processus neurodéveloppementaux. Des altérations de l’expression de RGS4 et de l’équilibre de sa signalisation ont été associées à des phénotypes neuropsychiatriques et cognitifs, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques de la régulation des voies des GPCR.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO RGS4 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène RGS4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du RGS4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert RGS4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine RGS4.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en RGS4 pour l'étude de la signalisation de RGS4, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de RGS4 essentiels à la fonction de RGS4
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de RGS4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le RGS4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le RGS4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus RGS4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le RGS4 plasmide HDR (h) et le RGS4 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie RGS4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles RGS4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.