Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plasmide CRISPR/Cas9 KO RFC4 (h): sc-403956
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- RFC4 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique RFC4, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: RFC4 Antibody (C-9): sc-28301
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO RFC4 (h) | sc-403956 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
RFC4 (replication factor C, sous-unité 4) est un composant essentiel du complexe chargeur de clamp RFC, qui charge PCNA sur l’ADN amorcé, permettant une synthèse d’ADN processive durant la réplication et coordonnant la réparation de l’ADN. Grâce à ses interactions, dépendantes de l’ATPase, avec PCNA et les ADN polymérases, RFC4 soutient la progression en phase S, la stabilité des fourches de réplication et les réponses liées aux points de contrôle en cas de stress réplicatif. La perturbation de RFC4 altère la dynamique de réplication de l’ADN et peut accroître l’instabilité génomique, reliant la fonction du complexe RFC à des voies fréquemment modifiées dans les troubles prolifératifs. En tant qu’élément du réseau plus large de réplication et de réparation de l’ADN, RFC4 est souvent étudié dans le contexte de la régulation du cycle cellulaire et des réponses au stress.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO RFC4 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène RFC4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du RFC4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert RFC4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine RFC4.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en RFC4 pour l'étude de la signalisation de RFC4, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de RFC4 essentiels à la fonction de RFC4
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de RFC4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le RFC4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le RFC4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus RFC4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le RFC4 plasmide HDR (h) et le RFC4 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie RFC4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles RFC4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.