Rent1 더블 틈내기효소 플라스미드 (h): sc-402462-NIC

UPF1(Rent1)은 넌센스 매개 mRNA 분해(NMD)를 담당하는 보존된 RNA 감시 경로의 핵심인 RNA 헬리케이스/ATPase를 암호화한다. NMD는 조기 종결 코돈을 인지해 비정상 전사체의 분해를 촉진한다. UPF1은 번역 종결 인자 및 SMG1, SMG5/6/7, UPF2, UPF3와 같은 NMD 구성요소들과 협력하여 전사체 품질 관리, mRNA 턴오버, 단백질 항상성(proteostasis)을 조절한다. 또한 UPF1 활성은 DNA 손상 반응, 텔로미어 유지, 항바이러스 RNA 제한과도 교차하여, RNA 대사를 더 광범위한 세포 스트레스 경로와 연결한다. NMD 및 UPF1 의존적 RNA 처리의 조절 이상은 신경발달 관련 표현형, 종양 생물학, 바이러스 감염 연구 등과 연관된 것으로 보고되어 왔으며, 그 결과 UPF1은 사람 세포에서 기전 연구를 위해 널리 표적화되는 대상이다.

Rent1 더블 니카제 플라스미드(h)는 human 세포주 내 UPF1 유전자좌의 고특이성 편집을 위해 설계된 쌍을 이루는 플라스미드로 구성됩니다. 각 플라스미드는 Cas9 D10A 니카아제와 UPF1 내의 반대 DNA 가닥을 표적으로 하는 고유한 sgRNA를 발현합니다. 반대 DNA 가닥의 인접 부위로 유도될 때, 두 니카아제는 서로 어긋난 단일 가닥 절단 부위를 생성하며, 이는 함께 엇갈린 이중 가닥 절단을 유발하여 두 가이드의 조화된 표적 활성을 필요로 합니다. 이렇게 생성된 DNA 절단은 내인성 세포 복구 경로, 특히 비동형 말단 결합(NHEJ)을 통해 해결되며, 이는 UPF1의 기능을 방해하는 삽입 또는 결실을 초래한다. 표적 부위에서 이중 sgRNA 결합을 요구함으로써, 이중 니킹 접근법은 편집 특이성을 향상시키고 표적 정밀도에 대한 추가적인 제어가 필요한 응용을 위한 보완적인 CRISPR 전략을 제공한다.

편집된 세포를 효율적으로 식별할 수 있도록, 한 플라스미드는 형광 시각화를 위한 GFP를 발현하며, 다른 플라스미드는 항생제 선별을 위한 푸로마이신 내성 유전자를 포함하고 있습니다. 이러한 기능들은 공동 형질 도입된 세포 집단의 효율적인 농축을 지원하며, UPF1 기능이 손상된 클론의 검증을 단순화합니다.

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