Particules Lentivirales d'Activation (h) Ref-1: sc-400932-LAC

APEX1 code pour le facteur redox multifonctionnel-1 (Ref-1/APE1), un nœud central reliant la réparation par excision de bases à la régulation redox de la transcription. En tant qu’endonucléase apurinique/apyrimidinique, Ref-1 traite les sites abasiques générés lors de dommages oxydatifs et d’alkylation, en coordonnant la synthèse de réparation en aval afin de préserver la stabilité du génome. Grâce à son activité redox, Ref-1 module la liaison à l’ADN de facteurs de transcription impliqués dans la signalisation du stress, l’inflammation et les décisions de destinée cellulaire, notamment AP-1, NF-κB, HIF-1 et p53. Une activité et une expression dérégulées d’APEX1/Ref-1 ont été associées à des réponses altérées aux dommages de l’ADN et à des programmes d’adaptation redox observés dans divers modèles de biologie du cancer, de neurodégénérescence et de maladies inflammatoires.

Les particules d'activation lentivirales Ref-1 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de APEX1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Ref-1 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription APEX1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Ref-1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif APEX1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.