rapsyn Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422599
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- rapsyn El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico rapsyn, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: rapsyn Anticuerpo (1234): sc-58585
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
rapsyn Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-422599 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Rapsn codifica rapsina, una proteína de andamiaje postsináptica que ancla y agrupa los receptores nicotínicos de acetilcolina en la unión neuromuscular, coordinando la maduración y el mantenimiento de la sinapsis. Mediante interacciones con subunidades del AChR y componentes del citoesqueleto, la rapsina favorece la estabilización del receptor, la organización de la placa motora y una transmisión neuromuscular eficiente. La alteración del agrupamiento dependiente de Rapsn perturba la arquitectura sináptica y la señalización en la placa motora, lo que vincula esta vía con la disfunción de la unión neuromuscular. Por ello, el gen Rapsn en ratón se utiliza ampliamente para modelar los mecanismos que regulan la sinaptogénesis, el tráfico de receptores y la estabilidad sináptica en el músculo esquelético.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO rapsyn (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Rapsn en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Rapsn junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Rapsn tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína rapsyn.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Rapsn para la investigación de la señalización de rapsyn, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Rapsn críticos para la función de rapsyn
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Rapsn para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido rapsyn CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido rapsyn CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Rapsn. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR rapsyn (m) y el plásmido HDR rapsyn (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Rapsn para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Rapsn definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.