RANK Lentiviral Activation Particles (h): sc-400559-LAC

Das humane Gen TNFRSF11A kodiert RANK (Receptor Activator of NF-κB), ein Mitglied der TNF-Rezeptor-Superfamilie, das RANKL-abhängige Signale weiterleitet und dadurch die Differenzierung und das Überleben von Osteoklasten sowie den Knochenumbau reguliert. Die Bindung von RANK aktiviert kanonische und nicht-kanonische NF-κB-Signalwege und greift mit MAPK- sowie PI3K/AKT-Pfaden ineinander, um transkriptionelle Programme zu koordinieren, die die Kommunikation von Immunzellen und die Gewebehomöostase steuern. Eine fehlregulierte Aktivität des RANK-Signalwegs wurde mit Störungen des Knochenstoffwechsels und entzündlichen Mikroumgebungen in Verbindung gebracht und wird häufig in Kontexten untersucht, die Skelettbiologie mit Immunsignalen verknüpfen. Als Membranrezeptor mit gut charakterisierten Ligand-Rezeptor-Dynamiken bietet RANK einen gut zugänglichen Einstiegspunkt für mechanistische Studien der Osteoimmunologie und von NF-κB-gesteuerten Gennetzwerken.

RANK Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente TNFRSF11A-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

RANK Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der TNFRSF11A-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen RANK-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen TNFRSF11A-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.